طراحی و استفاده از روش visual dna chip برای تشخیص عفونت ویروس نقص ایمنی اکتسابی (hiv-۱)

Authors

javad douzande

department of virology, school of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran mehrdad ravanshad

department of virology, school of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran manochehr rasouli

department of immunology research center of clinical microbiology of ostad alborzi, shiraz university of medical sciences, shiraz, iran farzaneh sabahi

department of virology, school of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran abdolvahab alborzi

abstract

هدف: ویروس نقص ایمنی اکتسابی نوع یک (hiv-1)، عامل ایجاد کننده نشانگان نقص ایمنی اکتسابی انسانی (aids) می باشد و تشخیص ژن ویروس hiv-1 در نمونه های مشکوک مدرکی جهت تشخیص عفونت است. انتقال بیماری از طریق انتقال خون در دوره پنجره در مراکز انتقال خون، یک معضل جهانی محسوب می شود. علاوه بر این، نیاز مبرمی برای تشخیص سریع، حساس و دقیق عفونت hiv-1 قبل از ظهور پادتن در بدن فرد آلوده در بیمارستان ها، مراکز بهداشتی و در نوزادان متولد شده از مادران آلوده وجود دارد. مواد و روش ها: روش سریع و حـساس تراشه ویـژوال dnaبا کمک rt-nested pcr و روش و سیستم نشانگر آنزیم- سوبسترا بکار گرفته شد. در ابتدا پس از طراحی و راه اندازی روش rt-nested pcr و اطمینان از به دست آمدن محصول مورد نظر، با استفاده از dntp نشان دار شده و با ماده دیگوکسی ژنین، روش یاد شده طراحی گردید. محصول به دست آمده بر روی تراشه، که از قبل مراحل آماده سازی آن انجام شده و کاوشگر به آن متصل گردیده بود، تحت شرایط هیبریداسیون قرار گرفت. پس از شستشوی تراشه، با آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین که با آنزیم آلکالین فسفاتاز، کونژوگه شده بود نزدیک کرده و پس از شستشو، در حضور سوبسترای bcip/nbt واکنش انجام گرفت. تولید رنگ ارغوانی، نشانه بر مثبت بودن آزمایش و حضور ژن ویروسی در آن نمونه می باشد و عدم تغییر رنگ مبنی بر منفی بودن آزمایش است. نتایج: 35 نمونه سرمی از مراحل مختلف عفونت (ایدز، علامت دار و بدون علامت) و 20 نمونه سرمی تأیید شده منفی، جمع آوری شد و با روش یاد شده مورد بررسی قرار گرفت. در تمام موارد مثبت رنگ ارغوانی مشاهده گردید، ضمن اینکه در هیچ کدام از موارد منفی رنگی مشاهده نشد. نتیجه گیری: در این پژوهش، مشاهده گردید روش طراحی شده، دارای حساسیت و اختصاصیت بالایی برای تشخیص عفونت ویروس hiv-1 می باشد. به نظر می رسد که ژن ویروسی را می توان حتی قبل از تغییرات سرمی و ظهور پادتن تشخیص داد و از این رو می توان دوره پنجره ای عفونت را کوتاه تر کرد. علاوه بر آن در نوزادان متولد شده از مادران آلوده به دلیل انتقال مادری پادتن ها روش های تشخیص پادتن و سرولوژی فاقد ارزش است و بنابراین از این شیوه می توان استفاده نمود. همچنین در این روش به دلیل حساسیت بالا، نمونه های سرمی مثبت با بار ویروسی خیلی پایین هم قابل تشخیص است.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV) با استفاده از وکتور EGFP-N1

Background and purpose: The purpose of this study was to design a recombinant vector pEFGP- N1 containing the full length of HIV-1Vpr gene. To the best of our knowledge, the cloning of Vpr gene in pEGFP_N1 is not previously done. Materials and methods: As a source of Vpr gene the pUC19-Vpr recombinant vector was confirmed by digestion with restriction enzymes BglII and NotI in order to separ...

full text

راه‌اندازی روش RT-Nested PCR به منظور تشخیص ویروس نقص ایمنی اکتسابی تیپ یک

  چکید ه   سابقه و هدف   ویروس نقص ایمنی اکتسابی تیپ یک( HIV-1 ) عامل ایجاد کننده سندرم نقص ایمنی اکتسابی انسانی”ایدز” می‌باشد. انتقال بیماری از طریق انتقال خون در دوره پنجره، در مراکز انتقال خون یک معضل جهانی محسوب می‌شود. علاوه بر این، نیاز مبرمی برای تشخیص سریع، حساس و دقیق عفونت HIV-1 قبل از ظهور آنتی‌بادی در بدن فرد آلوده در بیمارستان‌ها و مراکز بهداشتی احساس می‌شود. تشخیص ژنوم ویروس HIV-1...

full text

طراحی و راه اندازی روش TaqMan Real-time PCR جهت تشخیص و تعیین کمی ویروس نقص ایمنی اکتسابی نوع1 (HIV-1)

Background: Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) is one of the most important blood-borne infectious viruses that are considered a global problem, thus it is important to diagnose it with high accuracy and sensitivity. Serologic methods do not adequately detect this infection. Therefore, the purpose of the present study was to design a sensitive method based on TaqMan Real-time PCR me...

full text

طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (hiv) با استفاده از وکتور egfp-n۱

سابقه و هدف: در این پروژه، هدف کلی تحقیق طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (hiv-1) با استفاده از وکتور pegfp-n1 بود. کلونینگ ژن vpr قبلاً درون وکتور pegfp_n1 صورت نگرفته بود. مواد و روش ها: وکتور puc19 دارای ژن تمام طول vpr جهت تایید با استفاده از آنزیم های محدود کننده برش داده شد. سپس جهت اضافه کردن سایت های برش آنزیمی (xhoi, kpni) در ژن مورد نظر مطا...

full text

فراوانی عفونت ناشی از ویروس نقص ایمنی انسان (HIV) میان معتادین تزریقی شیراز

معتادین مواد مخدر، به ویژه نوع تزریقی، از جمله گروه های پرخطر از نظر ابتلا به عفونت ناشی از ویروس نقص ایمنی انسان (HIV) هستند. علت اصلی این مشکل، استفاده مشترک ازسرنگ آلوده برای تزریق مواد مخدر می باشد. به همین منظور این مطالعه را با هدف تعیین شیوع عفونت ناشی از HIV به اجرا در آوریم. تحقیق حاضر در 1061 نفر از معتادان که به صورت تصادفی انتخاب شده بودند، در اردوگاه بازپروری پیربنو شیراز در سال 13...

full text

تولید ویروس کاذب نقص ایمنی اکتسابی انسان

انتقال ژن خارجی به سلول ها با اهداف مختلف تحقیقاتی و درمانی و با بکارگیری سه روش فیزیکی، شیمیایی و زیستی صورت می گیرد. روش زیستی یا انتقال ژن با استفاده از ناقل های ویروسی یکی از پرکاربردترین روش های انتقال ژن در کارآزمایی هایی بالینی است. ناقل های لنتی ویروسی بر پایه جنس لنتی ویروس از خانواده رتروویریده تولید می شوند و ناقل های بر مبنای hiv-1 از پرکاربردترین این ناقل ها هستند. علت توجه به این ...

15 صفحه اول

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
پژوهش های آسیب شناسی زیستی

جلد ۱۰، شماره Spring ۲۰۰۸، صفحات ۹-۱۶

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023